高效液相色谱(HPLC)及其应用进展
张 霞
1、 高效液相色谱概述及其优点
高效液相色谱（HPLC）是一种现代液体色谱法，其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混和溶剂作为流动相，用泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的式样被流动相带入柱内进行分离后，各成份先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果。分离原理与常规液相层析相同，但与常规液相层析的区别是分离柱有效理论塔板数高、分辩率高、仪器设备差别也较大。高效液相色谱使用高压输液泵以提高流动相的流速和保持恒定的流量，选用高性能的分离介质为固定相以提高层析柱的分离度，采用高灵敏度检测器来提高仪器检测的灵敏度，能够准确检测流动相中的痕量组份。所以，HPLC具备快速、高效、灵敏等诸多优点。
2、高效液相色谱流动相、固定相及层析柱的种类
高效液相色谱的流动相主要有两类，一类是缓冲溶液，另一类是有机溶剂。缓冲溶液是使用最广泛的一种水溶液。缓冲溶液的选择，主要是根据待测物质的基本性质（包括等电点、极性、溶解度及稳定性等）来确定，选择合适的缓冲溶液及其浓度、pH值、离子强度、缓冲容量等。有些特殊的样品需要适当添加一些具有稳定作用的保护剂， 如抗氧化剂：DDT、巯基乙醇，稳定剂如尿素及蛋白酶抑制剂等。
有机溶剂的选择是根据待测物质的极性及溶解度来选择不同极性的溶剂。分离生物大分子常用的有机溶剂有甲醇、乙醇、乙腈、异丙醇等。
液相色谱的固定相是不溶于溶剂和水的固定化颗粒，也称之为层析介质、层析填料、填充剂等。可用于合成层析介质的材料很多，归纳起来主要有以下几类，即无机材料，如AL2O3、硅胶、硅藻土、沸石；有机材料，如聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸；多糖类材料，如葡聚糖、琼脂糖、聚丙烯酰胺等。
高效液相的层析柱大致分为两类，一类是根据层析柱管材的型号（柱内径和柱长短）可分为：超微分析柱、微量分析柱、分析柱、半制备柱、制备柱。另一类按层析柱的填料分为吸附层析柱、疏水层析柱、排阻层析柱、离子交换层析柱、离子对层析柱。
3、 高效液相色谱的分离模式
高效液相层析的分离模式多数是与常规液相层析相同，根据试样的理化特性和分离条件，可采用不同的分离模式。其中有吸附层析、离子交换层析、亲和层析、排阻层析、金属螯合层析、聚焦层析、疏水层析、离子对层析、灌注层析、反相层析。
4、 高效液相色谱仪的基本结构
主机的基本结构一般可分为4大系统，即高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统，另外还有5个辅助部分,即储液器、梯度混合器、进样器、超滤器和自动收集器。高压输液系统主要包括储液器、高压泵、压力阻力器等几部分组成。进样方式大致分为四种形式，即注射式隔膜进样法、停留式进样法、阀门式进样法和自动式进样法。分离系统主要是分离柱和流动池。检测系统主要包括检测器、循环系统和辅助系统，其中检测器主要是紫外检测器、红外检测器、荧光检测器、示差折光检测器、电导检测器、质谱检测器和核磁共振检测器。辅助系统主要包括过滤器、脱气装置、梯度混合器、收集器、记录仪。
5、 高效液相色谱的应用进展
1、 在中药分析中的应用
如HPLC测定金线莲口服液中牛磺酸、HPLC测定不同产地葛根中葛根素、大豆苷及大豆苷元的含量。
2、 在西药分析中的应用
如四物片中芍药苷的HPLC测定、巴柳氮钠及有关物质的测定。
3、 中药指纹图谱的建立
如黄芪皂苷类成分的HPLC指纹图谱、蜂王浆冻干粉指纹图谱、板蓝根指纹图谱
4、 农药分析中的应用
反相HPLC测定氰戊菊脂的含量、反相离子对HPLC测定杀虫单的含量
5、 残留分析
固相崒取-HPLC测定烟草和烟草添加剂中几中重金属如镍、铜、汞、锡、铅、镉、汞的含量、出口肉品中趺喃唑酮残留量的HPLC分析、出口水果中甲萘威残留量的HPLC分析
6、 食品分析中的应用
水果、蔬菜汁中游离氨基酸含量的测定、肉与肉制品中维生素E含量的测定
7、 其他如HPLC分析组合化学合成结构相似小分子多肽、HPLC测定饲料中盐酸氨丙啉的含量以及制备型液相色谱在天然产物如植物雌激素、蛋白质纯化中的应用。