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抱歉,因是初次用植物种子提取蛋白,现对如下工艺中两次过滤分别用何规格的滤布还不大明确,因此特作如下请教:(工艺如下)
植物种子用生理盐水研磨、石油醚脱脂、酸化溶液以提取、过滤、中和滤液、用20%Na2SO4沉淀、过滤、干燥滤饼、研磨过筛得干粉。
请赐教。谢谢
我也是植物分子生物学实验室出身。
不过没提过种子的蛋白质。就我们提取植物蛋白的经验而言,滤布的目数是根据具体的目的蛋白蛋白分子量确定的。
经过计算把小于多少的非目的蛋白滤掉。
告诉你一个秘诀,具体不懂可以打电话问这方面的大公司的技术支持,态度超好。
比如可以参考这个密理博的http://www.millipore.com/catalogue/module/c82301
中国生物器材网上的这方面专家还有 密理博公司 颇尔公司 GE-whatman公司,你可以打电话给他们问问。
如果你的实验室比较有钱,可以直接买他们的
如果想节省钱,那就根据他们推荐的目数去买相应的纱布,我们就是这样。又省钱又好用。
呵呵,仅供你参考。
======在 2010-3-12 11:02:00 您来信中写道:======
谢谢你的赐教。根据你的赐教滤布的问题基本解决了,因本人是初次利用植物提取蛋白,还有上述之内不大清楚的地方不知能否顺便向你补充请教(实在不好意思麻烦你了):
(1)上述所说用石油醚脱脂,不知你用过石油醚没有,按常规怎样用?
(2)上述所说酸化溶液以提取,按常规这酸化液的配比不知如何?是否要用查酸碱度的试纸查出调配后的酸碱度?
(3)上述所说用20%Na2SO4沉淀,这一溶液怎样调配?
如你没提过植物蛋白,就按你知道的常规理论知识赐教吧。再次向你表示谢意!
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您好!我并不是专家,根据我的理解解答如下:
滤布用水系的吧,因为是用生理盐水研磨;
滤布孔径的话根据蛋白的大小了,第一次过滤除渣,应该比第二次的粗一些了,第二次的接近蛋白大小;
石油醚脱脂没用过,找找文献看看别人的浓度,自己再试试吧;
酸化液目的应该是调节偏离开等电点,提高溶解度,测测加入酸化液后的pH应该就差不多了;
20%Na2SO4应该是质量分数,即100克该溶液含有20%Na2SO4和80%水。