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黄曲霉毒素主要存在于谷物、坚果、花生、棉籽粉、玉米、干辣椒粉等食品中以及一些与人类血液,动物饲料相关的产品中。霉菌的生长并不一定表明黄曲毒素的存在,因为黄曲毒素只有在湿度、温度适合及通风良好才会生成。黄曲霉素B类具有蓝色荧光,G类具有绿色荧光。除了蔬菜中常见的(B1,B2,G1,G2),还有存在喂食了有毒饲料的奶牛的牛奶中的黄曲霉素M,其中毒性最高的M的代谢物为4-羟基化的产物Bs.黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的羟基化代谢产物,也是一种强致癌物质。其危害巨大,人类日常消费食品中如牛乳及其制品是易受到黄曲霉毒素M1污染的食品之一。黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用,严重时,可导致肝癌甚至死亡。毒性是砒霜的100倍其实主要是指黄曲霉毒素比砒霜毒。
目前来讲,Aflatoxin M1的检测方法有高效液相色谱法(HPLC),酶联免疫检测法等。液相色谱法可以精确的检测奶制品中黄曲霉毒素的微小含量。而使用黄曲霉毒素M1 ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析样品中黄曲霉毒素M1残留。
作为国内专业从事霉菌毒素检测技术与产品服务的主要供应商, 2010年泰乐祺科技投巨资成立了"检测应用实验室",重点关注食品安全事件尤其是涉及霉菌毒素安全等检测技术问题,以期望快速提出解决方案。近期应针对奶中出现的黄曲霉毒素M1超标问题,泰乐祺科技提供了两种检测方案,可以帮助企业轻松应对奶中黄曲霉毒素M1的限量检测。
高效液相色谱法:
根据国标《GB 5413.37—2010》食品安全国家标准乳和乳制品中黄曲霉毒素M1 的测定
实验用前处理:
实验仪器和好耗材包括:
恒温水浴锅 溶剂过滤器(带真空泵)1000ml 高速匀质器 黄曲霉毒素免疫M1亲和柱
玻璃纤维滤纸 玻璃注射器 无荧光特性玻璃试管 空气压力泵 超声波清洗机 定量滤纸
量筒
样品瓶
容量瓶
移液器或移液管
实验用试剂:色谱乙腈 色谱甲醇 氢氧化钠 石油醚 超纯水或去离子水等等
样品前处理:分不同样品
牛奶
水浴加热至40度,离心用上清液过柱净化;
乳粉和粉状婴幼儿配方食品:称取适量奶粉样品,用于蒸馏水中,混合均匀使其充分溶解,离心离心用上清液过柱净化;
发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型):称取适量奶粉样品,用于蒸馏水中,调节PH值至微碱性,高速均质器匀浆,水浴加热后离心,取上清液混合均匀使其充分溶解,离心离心用上清液过柱净化;
干酪:称取适量切细或粉碎,过筛用加纯水溶解,高速均质器匀浆,超声提取后收集上清液,然后用石油醚进行两次萃取,然后用适宜的有机溶液萃取,取若干上清液过柱净化
奶粉样品,用于蒸馏水溶解中,调节PH值至微碱性,水浴加热后离心,取上清液混合均匀使其充分溶解,离心离心用上清液过柱净化;
奶油:称取适量加甲醇水溶解,震荡后分页漏斗取下层溶液,蒸干后溶于水用于过柱净化。
免疫柱净化步骤:完全符合GB/T 18980-2003
┅┅取出免疫亲和层析柱, 恢复至室温,将上方塞子取出斜剪断,再插回亲和柱上。
┅┅将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下。准确移取清澈液注入玻璃注射器;
┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以约2-3mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱,直至2~3mL空气通过柱体;
┅┅更换玻璃注射器与亲和柱连接,在注射器中加入10ml水,调节压力使水以约6mL/min流速清洗亲和柱。
┅┅准确加入4mL色谱级乙腈洗脱,流速为1 mL/min
~2mL/min,收集全部洗脱液于玻璃试管中,供检测。