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DNA甲基化是基因组DNA的一种主要表观遗传修饰形式。近年来,大量研究表明DNA甲基化修饰对于维持正常细胞功能、传递基因组遗传印记、胚胎发育以及人类肿瘤发生,起着至关重要的作用,由此甲基化研究成为表观遗传学,乃至生命科学研究的热点领域。
那么如何检测单个基因或者全基因组的甲基化水平或者甲基化位点呢?
当前科研领域最常用的检测方案是使用亚硫酸盐将DNA中未甲基化的胞嘧啶(C)转化为尿嘧啶(U),而甲基化的胞嘧啶则保持不变,通过设计特异性的甲基化引物,进行甲基化特异性-PCR或者亚硫酸盐测序法,从而达到实验目的。那么如何确保DNA中未甲基化的胞嘧啶100%完成了转化,转化过程中防止DNA降解,以及转化后DNA的有效回收成了其中关键!
许多研究人员都会在亚硫酸氢盐转化之前富集甲基化的DNA。一来可降低背景,二来也可节约成本。目前有两种基本方法,一个是利用5’-甲基胞嘧啶的抗体来捕获甲基化DNA,即甲基-DNA免疫沉淀(MeDIP);另一个是利用包含了甲基-CpG结合结构域(MBD)的蛋白来得到同样的结果。
目前市场上的大部分产品都是利用后一种方法。这两种方法的差别在于MeDIP是在单链DNA的背景下特异识别5’-甲基胞嘧啶,而后者更偏爱双链DNA。MBD的另外一个优势是:在利用蛋白酶K将免疫沉淀后的DNA洗脱下来时,MBD2中的甲基化DNA可根据盐梯度而逐步释放。这样,你就能区分不同程度的甲基化DNA。
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快速:96个样品同时操作,仅需1h20min,平均下来每个样品只需50s。本试剂盒作为一款基于96孔板的,适用于高通量研究的DNA亚硫酸盐转化试剂盒,还具有以下优点:
*本试剂盒需配套96孔磁力架使用
(EpiMag HT (96-Well) Magnetic SeparatorCat#Q10002-1)
Figure.2 试剂盒操作流程示意图 Figure.3 转化后DNA,qPCR验证的效果图
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