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标题:[分享]细胞凋亡 上海百传生物

1楼
tt080722 发表于:2012-12-24 10:47:00

上海百传生物科技有限公司(Shanghai Bio-TranBio-Technology Ltd)是一家集研发,生产、销售和服务为一体的生物高科技企业,专业研发生产具有自主知识产权的分子生物学实验研究用产品,包括小核酸(siRNAmicroRNAantisenseRNA等)动物体内转染试剂盒、体外细胞株转染试剂盒、原代细胞转染试剂盒、DNA转染试剂盒、细胞凋亡检测试剂盒及PCR相关产品,并提供各种实验服务。

细胞凋亡为一种细胞程序性死亡。相对于细胞坏死(necrosis),细胞凋亡是细胞主动实施的。细胞凋亡一般由生理病理性因素引起. 而细胞坏死则主要为缺氧造成,

两者可以很容易通过观察区分开来。在细胞凋亡过程中,细胞缩小,DNA核酸内切酶降解成180bp-200bp片段属于有层次之断裂,(可以通过凝胶电泳证明),而细胞坏死时,细胞肿胀,细胞膜被破坏,通透性改变。细胞器散落到细胞间质,需要巨噬细胞去清除,结果是该局部组织发炎。相比起细胞坏死,细胞凋亡是更常见的细胞死亡形式。

细胞凋亡是动物发育过程中的必经之路:

细胞凋亡过程可分为两阶段:开始阶段和效应阶段。

所谓的效应caspase,指的是Caspase 3, 6 和 7这些能引起细胞的程序性死亡的蛋白酶。一方面它们通过有限的蛋白质水解酶激活下游的目标蛋白(如Caspase激活的去氧核糖核酸酶, CAD, 或是其他的Caspase)。另一方面它们参与核纤肽(在细胞膜上)和肌动蛋白(细胞骨架的成分)的分解过程。 另一方面,DNA的修复会为caspase介导的阻抗反应而受到抑制。

最后细胞慢慢地缩小为一小颗粒,并且为邻近具有吞噬能力的细胞所吞噬。相对于细胞坏死,细胞膜在凋亡过程中保持完整。

细胞色素C从线粒体中溢出到细胞质,这是细胞凋亡的标志之一。这在外始式途径中是在凋亡过程后期才出现的,这里它反而是凋亡的结果,而不再是在内始式途径中所担任的激发者的角色了。

百传生物的凋亡试剂产品TUNEL(TdT mediated dUTP Nick End Labeling)是检测细胞凋亡的经典方法。本试剂盒采用TUNEL法,应用高活性的基因重组末端脱氧核糖核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)在凋亡细胞断裂的DNA 3-羟基(3-OH)末端催化掺入荧光素-12-脱氧三磷酸尿苷(FITC-12-dUTP),通过检测FITC-12-dUTP标记的DNA片段来检测细胞凋亡。FITC-12-dUTP标记的DNA可以用荧光显微镜直接观察,也可用流式细胞仪检测。本试剂盒已经多次优化, FITC-12-dUTP标记和未标记dNTP处于最佳搭配比例,这样在进行3-OH末端核苷酸掺入时,同一个断裂的DNA片段末端可以有更多的FITC-12-dUTP掺入,从而大大提高了检测的灵敏度,减少了背景反应。再加上我们高活性的TdT酶,使得本试剂盒的检测信噪比大大提升,而背景非常干净。

产品优点:1、标记dNTP与未标记dNTP的比例经多次优化,高信噪比,高灵敏度;

2TdT酶为基因工程重组产品,活性高,荧光掺入效率高,背景低;

3、适用于涂片、爬片、石蜡切片和冰冻切片。

大家也可以加学术QQ群交流咨询:201011928

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