标题：琼脂糖凝胶小量回收试剂盒

                       琼脂糖凝胶小量回收试剂盒

说明 :

产品说明：

本试剂盒可以简单、快速、高效的从琼脂糖凝胶或PCR反应产物中回收DNA片段，有效纯化长度在100bp-20kb的片段，回收率高达80-90%。

保存条件：

Buffer GC应避光保存，其他组分室温保存。

使用前请注意：

  使用前请分别在DNA Wash Buffer中加入8 mL (DC3511/DC3514-00) 或者60 mL(DC3511/DC3514-01) 或者96 mL (DC3511/DC3514-02) 或者60 mL (DC3511/DC3514-03) 100% 乙醇。
  溶解100 mg的琼脂糖凝胶，约需要100 µL Buffer GC。
  溶胶液GC 在较低温度下易沉淀，若温度较低，出现沉淀，使用前请在37 oC加热几分钟，至沉淀溶解后再使用。
  本试剂盒所有操作步骤均在室温下进行。

用户自备材料:

  100% 乙醇
  台面离心机和1.5 mL 微型离心管
  55-60 oC 水浴(胶回收时用)
  真空装置(真空步骤时用)
  小于200 bp的片段的可加异丙醇。

PCR产物纯化/胶回收离心法操作步骤：

1. PCR产物纯化：在1倍体积的PCR反应物中加入2倍体积的 Buffer GC，涡旋充分混匀。对小于200 bp的PCR产物，加入5倍体积的Buffer GC。

胶回收：将含DNA片段的琼脂糖凝胶切下，转至1.5 mL离心管中，再加入1倍体积的Buffer GC (100 mg的凝胶加入100 µL Buffer GC)。在55-60 oC下培育8分钟左右，且每隔2分种轻弹试管底部，直至胶溶解完全，放置使其冷却至室温。

建议:  
为取得最好的实验结果，请使用新鲜配制的电泳缓冲液制胶和电泳。
切胶时，尽量缩短在紫外灯下照射的时间，以减少紫外对DNA的损伤，并尽量切除不含DNA的凝胶。
若DNA片段小于200 bp，请加入1体积的异丙醇。

2. 转移700 µL DNA/Buffer GC 混合溶液至离心柱中，室温下，13,000 x g下离心1分种，弃废液，将离心柱放回收集管中。重复此步使剩余的溶液通过柱子。

3. 加入300 µL of Buffer GC到离心柱中，室温下13,000 x g离心30-60 秒，弃废液。

4. 加入650 µL DNA Wash Buffer （确保已将乙醇按说明书要求加入DNA Wash Buffer中），室温下在13,000 x g下离心30秒，弃废液。重复步骤4。

4. 13,000 x g开盖再次离心3分钟，以去除柱中残余的乙醇。
注意：此步操作对DNA的产率多少极为关键。

5. 将柱子放入干净的1.5 mL试管中，向柱中加入在60oC 下预热的30-50 µL Elution Buffer或ddH2O。在室温下放置1分钟。13,000 x g 离心1分种以洗脱DNA。将洗脱液重新上柱，再次离心洗脱。

建议: 将洗脱缓冲液预热到65 oC，加洗脱液后将柱子整个温育5分钟后再离心洗脱可以增加DNA回收效率。
对大于8kb的片段，加洗脱液后将柱子整个温育15-30分钟可以提高回收效率。

PCR产物纯化/胶回收真空/离心法操作步骤


1. 将含DNA片段的琼脂糖凝胶切下，转至1.5 mL离心管中，再加入1倍体积的Buffer GC(100 mg的凝胶加入100 µL Buffer GC)。在55-60oC下培育8分钟左右，且每隔2分种轻弹试管底部，直至胶溶解完全，放置使其冷却至室温。

2. 准备真空装置，将柱子与歧管连接。

3. 将 DNA/Buffer GC 混合溶液转移至离心柱。

4. 打开真空装置，溶液流下。

5. 加入650 µL的DNA Wash Buffer漂洗离心柱。

6. 重复步骤5。再真空抽2分种。

7. 将柱子放入收集管，开盖在最高速离心2分种以除去乙醇。

8. 将柱子放入干净的1.5 mL试管中，向柱中加入30-50 µL Elution Buffer或ddH2O。在室温下放置1分种。13,000 x g 离心1分种以洗脱DNA。

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