标题：北京伯奥克生物技术有限公司SELDI蛋白质纯化鉴定服务

北京伯奥克生物技术有限公司SELDI蛋白质纯化鉴定服务

实验目标

针对血清、血浆、体液、组织、真菌、细菌、细胞培养物以及植物等样本的差异蛋白质组研究，以蛋白质芯片为载体，通过对目标疾病样本组及对照组之间进行鉴定，以期找到能够区分不同组别的差异峰，并通过对差异峰进行蛋白质鉴定找到与目标疾病密切关联的基因/蛋白。 

实施方案    

一、目标蛋白

1.利用SELDI-TOF-MS蛋白芯片系统寻找出蛋白表达谱中有意义的差异蛋白。

2.筛选符合p<0．05为统计学有显著性差异蛋白或由BPS聚类软件计算得出的诊断模型组成蛋白。

二、目标蛋白的分离纯化

1.利用白蛋白/IgG去除试剂盒去除样本中高丰度蛋白。

2.利用分子筛K30-100去除样本中的分子量大于30-100Kda的蛋白。

3.利用与先前SELDI蛋白表达谱所用的蛋白质芯片相一致的纳米磁珠吸附包含目标蛋白在内的一类蛋白（如SELDI表达谱所用WCX2芯片则选用WCX磁珠）。

4.蛋白浓缩，将吸附后的蛋白液体汇集到EP管置于冷冻干燥机冻干8小时，即得到蛋白冻干干粉。

5.蛋白定量，总蛋白量需达到50-100ug，入量不够可继续按之前步骤增加样品用量。

6.Tricine聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine -SDS-PAGE)。

三、胶内蛋白质原位酶解和质谱鉴定 

四、目标蛋白的免疫学验证

(一)酶联免疫吸附测定（ELISA）验证鉴定出的蛋白质

(二)免疫沉淀（Immunoprecipitation）和蛋白质芯片检测

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