标题：[推荐]孔雀石绿前处理试剂（液相法或液质法）

本标准规定了水产品中孔雀石绿及其代谢物隐色孔雀石绿、结晶紫及其代谢物隐色结晶紫残留量的高效液相色谱、液相色谱-串联质谱的快速测定方法。

本标准适用于鲜活水产品及其制品中孔雀石绿及其代谢物隐色孔雀石绿、结晶紫及其代谢物隐色结晶紫残留量的测定。

液相色谱法

1原理

试样中残留的孔雀石绿、结晶紫及其代谢物隐色孔雀石绿、隐色结晶紫经快速检测前处理试剂盒提供的试剂提取、浓缩后用液相色谱进行检测，外标法定量。

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。

4测定步骤

提取：准确称取已捣碎的样品5克于50毫升离心管中。先加入孔雀石绿。结晶紫快速检测前处理试剂盒中的提取剂1（液体20毫升），用匀浆机8000r/min.的速度均质30秒，再加入提取剂2（固体粉末），震荡1分钟，4000 r/min离心5分钟。

新柱激活：对于第一次使用的层析柱，依次加入2毫升洗脱剂（色谱纯乙腈+冰乙酸=98+2（V/V））、5毫升洗涤剂（冰乙酸+甲醇=20+80（V/V））、5毫升蒸馏水挤干。

净化：取上清液5毫升于50毫升试管中。加入10~15毫升水混匀，分次加入孔雀石绿层析柱中，用洗耳球从上口挤压加快流速或固相萃取机从下抽真空，液体流完后加5毫升洗涤剂（乙腈+水=20+80（V/V））洗涤，挤干柱中液体，加0.8毫升洗脱剂（色谱纯乙腈+冰乙酸=98+2（V/V））洗脱。收集洗脱液，用缓冲液定容至1毫升。微孔滤膜过滤，滤液供仪器测定。

6.1检测限

本方法孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测限均为2.0μg/kg。

6.2回收率

本方法孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫回收率为:85%～105%。

液相色谱-串联质谱法

1原理

试样中残留的孔雀石绿、结晶紫及其代谢物用孔雀石绿、结晶紫快速检测前处理试剂盒提供的试剂提取、浓缩后用液相色谱-串联质谱进行检测，外标法定量。

2试剂和材料

4.1提取和净化

准确称取已捣碎的样品5.00 g于50 mL离心管中,先加入孔雀石绿、结晶紫快速检测前处理试剂盒中­­的提取剂1^*(液体20.0 mL)，用匀浆机以8 000 r/min的速度均质30 s，再加入提取剂2^*(固体粉末), 振荡1 min,4 000 r/min离心5 min，取上清液10.0 mL于鸡心瓶中再加入异丙醇10 mL，
        50℃～55℃水浴旋转蒸干。残留物用2.5 mL流动相溶解，溶解液放入2.5 mL离心管中，8000 r/min离心5 min后，用微孔滤膜过滤，滤液供仪器测定。

4.2绘制标准工作曲线

移取孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫混和标准溶液，用流动相稀释成0.1 ng/mL、0.2 ng/mL、0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、5.0 ng/mL、10 ng/mL标准工作溶液，用高效液相色谱-串联质谱仪测定，得出标准工作曲线。

6.1测定低限

本方法孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测低限均为0.5 µg/kg。

6.2回收率

本方法孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫回收率均为:85%～105%；

本公司提供前处理试剂

北京六角体科技发展有限公司

戈立华

010-59771652/53/54-812