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标题:禽流感间接ELISA试验

1楼
biodak-wang 发表于:2009-4-20 15:56:00
1.原理与意义:禽流感ELISA诊断技术,采用现代生物工程技术制备的具有群和型的特异性的重组核蛋白基因表达产物固化于固相载体表面,将抗种属特异性的免疫球蛋白用酶标记,使其既保持酶活性又带有免疫活性,从而将酶化学反应的高度特异活性及敏感性与抗原抗体反应的特异性结合起来,在纳克水平上对抗原抗体进行示踪定性。因此,该技术既具有高度的特异性,又具有极高的敏感性,并能保证检出已知各亚型禽流感病毒株及所有变异禽流感病毒株的阳性血清。
禽流感间接ELISA诊断试剂盒是将成熟的诊断技术和成套的成品试剂组装成试剂盒,由间接ELISA快速诊断板、1-8号液、底物片剂组成,使用该试剂盒,自备生理盐水即可同时对大量样品进行检测,结果特异性强、敏感性高、重复性好、可肉眼判定、准确直观、反应快速。
2.作用与用途:本试剂适用于禽流感的早期快速诊断、现地疫病监测、流行病学调查及口岸检疫等领域,特别适用于大批样品的同时检测。
3.用法与用量
3.1.使用液准备
3.1.1稀释液:1号液加生理盐水90毫升;
3.1.2洗液:2号液加生理盐水240毫升;
3.1.3酶标抗体使用液:3号液加稀释液12毫升;
3.1.4底物使用液:将底物药片放入4号瓶,全溶后,与5号液混合(用时现配);
3.2操作步骤
3.2.1样品准备:将被检血清用稀释液作1:400稀释;


供参考的稀释法:
稀释倍数:        1:20      1:400
被检样品(微升)      5        5
稀释液(微升)       95       95
3.2.2加样:A1、B1、C1、D1四孔不加样,做空白调零用;将阴性血清、阳性血清和1:400稀释的被检样品各加1孔,每孔100微升。将加样位置做好记录,置37℃30分钟。
3.2.3洗涤:倒掉孔内液体,在吸水纸上控干,每孔加满洗液,3-5分钟倒掉,控干,再重复两次。
3.2.4加酶结合物:除A1、B1、C1、D1外,每孔加酶标抗体使用液100微升,置37℃30分钟,洗涤同“2.3”
3.2.5底物显色:每孔加底物使用液100微升,室温避光2-3分钟,每孔再加8号液50微升。(见“注”)
3.3判定标准:用酶标仪测定每个孔在490nm波长的光密度值(即OD值),OD值超过0.20者判为阳性,否则判为阴性。
注:8号液为2MH2SO4,若可自行配制,可加100微升。
4.注意事项
4.1严格按使用说明方法操作;
4.2待检血清样品出现溶血、腐败时勿用;
4.3操作用器皿必须清洁;
4.4底物使用液一定要现用现配;
4.5每次试验要设阳、阴性血清对照。
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