标题：[原创]pPICHOLI 穿梭载体系统

穿梭表达载体pPICHOLI和pPICHOLI-HA结合了真核和原核启动子元件。噬菌体T7启动子，含有主要衣壳蛋白的核糖体结合位点，促进细菌的表达，它被放在P. pastoris启动子的下游。强的乙醇脱氢酶启动子（AOX）是被紧紧调控的，在含有葡萄糖的培养基中，蛋白表达是完全被抑制的，而生长在甲醇中，则可被最大限度的诱导。

pPICHOLI-1（3579bp）有两个G bases直接位于Sal位点的上游，pPICHOLI-2（3578bp）和pPICHOLI-3（3577bp）分别敲除一个和两个G bases。

pPICHOLI-HA载体含有一个HA（血球凝集素）抗原决定簇代替了生物素酰化序列。

pPICHOLI-C加进了酿酒酵母CUP1   启动子（代替了AOX启动子）。这个载体没有T7启动子，不适合原核蛋白的表达。

由于使用了共同的选择标记zeocin，这个穿梭载体仍然是小的（~3.6和3.2kb），因此，操作、克隆和转化都很方便。通过将Pichia特异的自主复制序列（PARS1）整合到pPICHOLI载体中，线性化不再是必需的，转化效率增加到10⁵转化体/ug DNA。pPICHOLI双重表达载体包括一个RGS（His）6tag和一个生物素化序列，这样就使表达蛋白易于检测和快速的纯化。