标题：AmpAll全基因组扩增试剂盒——上海百赛生物技术公司

AmpAll全基因组扩增试剂盒——上海百赛生物技术公司 AmpAll全基因组扩增试剂盒——上海百赛生物技术公司◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎Ih0r534hhV 本公司推出的该试剂盒可以从少量样本中稳定扩增全基因组DNA。该试剂盒包括分离和扩增DNA的试剂，适用的样本广泛，包括已纯化的基因组DNA、全血、组织培养细胞、显微切割得到的细胞、速冻的组织切片、血浆血清中的细胞、口腔细胞、血斑。◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎S2kQ9FZHr7 一、AmpAll-kit的应用：◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎YIJy3GeR3J 1. 用来从全血和组织培养细胞中直接分离扩增全基因组DNA◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎kXE20ybxPX 研究人类疾病的时候，我们无法大量采集病人的血液或者仅仅只能获得极少量血样，导致DNA样本量不足，为基因分型和DNA序列分析的研究带来极大不便。AmpAll-kit可以从0.5ul血液或者0.5ul细胞悬液（大于600个细胞/ul）中扩增得到40ug基因组DNA，使得研究者可以不用再为样本少而发愁。◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎HcPYRumkFU 2. 扩增已经纯化的基因组DNA。◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎6cUaVbLp73 不少研究机构保存了大量年代久远的珍贵DNA样本，而随着时间推移，这些样本出现原因不明的质量下降，无法很好的应用于下游DNA序列分析。使用AmpAll-kit扩增这些样本，使这些陈旧的DNA样本重获新生。◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎kvve2SxAas 二、AmpAll-kit的原理◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎UIB67OoqKC AmpAll-kit试剂盒采用的多重置换扩增（MDA）技术,能对基因组DNA进行稳定的扩增。首先随机六碱基引物在多个位点与模板DNA退火，接下来Phi 29 DNA 聚合酶在DNA的多个位点同时起始复制，它沿着DNA模板合成DNA,同时取代模板的互补链。被置换的互补链又成为新的模板来进行扩增，因此最终我们可以获得大量高分子量的DNA。REPLI-g试剂盒中使用独特的Phi 29 DNA聚合酶，该酶对于模板有很强的模板结合能力，能连续扩增100Kb的DNA模板而不从模板上解离。同时这种酶具有3’—5’外切酶活性，可以保证扩增的高保真性。◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎BesCDMcyqu ◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎ifnB2nbxC0 图-1 MDA原理示意图◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎81OBov9Kdv 三,高产量:◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎LJsnEu5Kpd 10ng(甚至小于1ng)基因组DNA经扩增后可产生>15ng(20ul反应体系)或35ng(50ul反应体系)的DNA反应产物,因此扩增倍数可达上万倍.◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎qSdZhYdlfH 四、高质量◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎2NPxdwAaqN 1)全基因组扩增后的产物长度可达100kb.平均长度大于10kb(见下图),所以该产物可用于克隆,单倍型确定以及长片断PCR等实验.◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎zMuVlCyInF 目录号 包装 样本◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎Y7fzAyIxXW Cat.101AS 50反应x20ul 基因组DNA◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎62wzl3LcF3 Cat.102AL 500反应x20ul 基因组DNA◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎mF5L5rRa9Y Cat.103BS 25反应x50ul 血样,发根.口腔粘膜刮液等◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎U9BNKrhovl Cat.104BL 100反应x50ul 血样,发根.口腔粘膜刮液等◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎WIwh9NMn3a ◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎3Y3o1bEMu2 2)当用于扩增DNA模板达到一定量时(基因组DNA>10ng或细胞数>600个),不同基因位点的扩增效率相当一致,因此扩增覆盖率可接近100%.◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎zPty4LDzx7 3)该试剂盒用的是高保真的具有强DNA链置换活性的Phi 29 DNA聚合酶,在扩增过程中,碱基突变引入或短串联重复系列(STR)复制滑移发生的概率非常低,因此该扩增产物完全可用于后续的DNA分析如测序,SNP和STR分型等.◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎8PN9Tyima6 ◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎zcEpe2lYCB AmpAll-kit操作流程◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎FmLyfjBE1c 1,将ddH2O,10xBuffer1, 10xBuffer2及样本DNA室温熔化后.振荡混匀.◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎fhaWtR4N5S 2,根据要扩增的样本数(N).在微量离心管中配制反应混合液(以模板1ul为例)◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎7BsZnLxK3h 9ul NX◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎RxhS7lCbQw DdH2O 6.4ul 6.4Nul ◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎Zd82Uk7Vud 10xBuffer1 1ul 1Nul◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎8D67HnA3i8 10xBuffer2 1ul 1Nul◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎Ukxetmcrkb Phi 29 聚合酶 0.6ul 0.6Nul◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎lPeCmRfJ4j 注意:如果模板浓度太低,可以增加样本体积(可至3ul ).这样ddH2O 就相应的减少.◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎jMVzLgmWwT 3,将混合液振荡混匀,分装到96孔板或0.2ml的PCR管中,每管9ul◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎uKBilMxBXo 4,加入1ul样本DNA,然后贴上96孔板膜或盖好盖子,振荡混匀后离心.◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎gG7u7Nxa9d 5,放置到30摄氏度水浴锅温浴12个小时以上或过夜◎中国生物技术论坛 © Copyright 2004-2006 版权所有◎dGBhlUK8s8 6,65°C灭活10min后.-20°C保存◎