基因组DNA小量提取纯化试剂盒
试剂盒组成及包装
50次 100次 200次
1、DE buffer 25ml 50ml 100ml
2、W1 25ml 50ml 100ml
3、W2 25ml 50ml 100ml
4、EB 5ml 10ml 20ml
5、离心吸附柱 50个 100个 200个
6、废液收集管 50个 100个 200个
7、产品说明书 一份 一份 一份
实验准备：1.请按照标签指示在W2中加入无水乙醇，混匀，盖紧保存。
2.检查各溶液中是否有盐析出，若有，请于37℃-65℃温浴溶解。
使用说明：
1. 细胞裂解或组织匀浆。
a. 贴壁细胞：吸尽培养液，按照每20平方厘米细胞加入500ul DE buffer，晃动3-5下，再用枪吹打2-3下，确保全部裂解，然后吸至离心管中。
b. 悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，每一千万至两千万动植物或酵母细胞，或两千万细菌，加入500ulDE bufferl，适当vortex，确保全部裂解。某些酵母和细菌如裂解不充分，可用匀浆器匀浆，或者用液氮研磨，确保全部裂解。
c. 组织：先将组织剪切成小块，放入普通玻璃匀浆器内，或者用液氮研磨组织样品。每100mg组织加入500ul DE buffer，匀浆。
2．室温最高速离心10mins。
将离心吸附柱置于2ml离心管中，转移上清液到离心吸附柱（尽量去除杂质）中，10,000rpm 离心30s，弃滤液。
将离心吸附柱置回离心管中，加入500ul W1于离心吸附柱中，10,000rpm 离心30s，弃滤液。
将离心吸附柱置回离心管中，加入500ul W2（加入无水乙醇否？）于离心吸附柱中， 10,000rpm 离心30s, 弃滤液。以同样的方法再用500 ul W2溶液洗涤一次；
将离心吸附柱置回离心管中，最高速度离心1min，以弃净W2。
小心取出离心吸附柱，将其套入一个无菌的1.5ml 离心管中，在吸附膜中央加入50ul EB（Eluent Buffer）,室温静置2-10mins后，最高速度离心1min洗脱DNA。
取出离心吸附柱，将1.5ml 离心管（DNA溶液）置于-20℃保存备用。
问题指南
结合柱阻塞：
A.样品太黏滞，起始原料的量太多。建议增加DE Buffer的用量，并且每个样品用2个或以上的结合柱。
B.残留细胞碎片，第一次高速离心后转移上清液时，确保无原材料颗粒一起被转移。
低DNA量：
A.组织或者细胞裂解不好，减少原材料的量，或增加DE Buffer的量。
B.DNA仍然结合在结合柱上，在离心之前把整个包着柱的离心管在65℃下水浴5min。
以后的应用中出现的问题:
A.残留盐，W2必须在室温下保存。
B.残留乙醇，在第三次离心洗涤后，确保结合柱在高速离心1min的情况下已经干了。
[此贴子已经被作者于2005-5-28 19:55:23编辑过]