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荧光定量PCR技术是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时监控反应过程。随着 PCR 反应的进行,反应产物不断累积,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一次荧光强度信号,这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,结合相应的软件对产物进行分析,可以得到荧光扩增曲线,计算待测样品初始模板的量。实时荧光定量PCR技术是一次由定性技术向定量技术的飞跃,运用该项技术,可以对DNA、RNA样品进行相对定量、绝对定量和定性分析。
包括RNA提取、反转录和扩增,采用SYBR Green I法和TaqMan探针法两种方式,一般采用2-ΔΔ Ct法进行计算。每个样本重复三次,我公司提供常用内参基因引物。
某客户研究转基因表达检测,利用荧光定量方法进行相对定量分析,确定是否成功表达。