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生物器材论坛留言板『难题求援』 → [分享]如何传代贴壁细胞?

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标题: [分享]如何传代贴壁细胞?
钰森
美女呀,离线,留言给我吧!
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[分享]如何传代贴壁细胞?
如何传代贴壁细胞?


细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。

悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。一般使用蛋白水解酶(比如胰蛋白酶)消化贴壁细胞成单个细胞,也可加入乙二胺四乙酸(EDTA)提高消化能力,EDTA 是一种二价离子的螯合剂,能抑制细胞膜上的Ca2+和Mg2+。常用的细胞消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03% (w/v) EDTA,一般用不含Ca2+和Mg2+的盐溶液配置,先用胰酶-EDTA 消化液清洗细胞(5.0 -10.0 ml/75cm),然后弃去消化液,重新加入少量的胰酶-EDTA 消化液(2.0 to 5.0 ml/75 sq. cm flask),观察细胞直到细胞变圆脱离瓶壁,此过程一般需要5-15分钟,为了避免细胞成团,消化细胞的过程中不要拍打细胞瓶。对于特别难消化的细胞,可以加入胰酶EDTA 消化液后把细胞置于37°C 促进消化,细胞脱离瓶壁后,立刻加入含有血清的完全培养基中止消化,血清中某些蛋白质能够抑制胰酶的活性。
一般情况下,离心并不需要。如果细胞需要无血清或者低血清的培养基,可以以125000g 转速离心5分钟,然后弃去中止用的培养基,加入适合的新的培养基轻轻混匀细胞,移入到新的培养瓶。传代的比例视细胞类型而定,一般是1:2-1:20,具体比例可参考说明书。胰蛋白酶会对某些细胞的细胞膜产生损伤,对于这种类型的细胞,可用细胞刮轻轻刮下细胞,加入适量的培养基,轻轻吹打混匀细胞,然后进行传代培养。(来源微信usen2003)
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2017-5-8 17:44:00
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