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生物器材论坛留言板『难题求援』 → [分享]胰酶消化传代的最佳浓度~是否应含EDTA~

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标题: [分享]胰酶消化传代的最佳浓度~是否应含EDTA~
钰森
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[分享]胰酶消化传代的最佳浓度~是否应含EDTA~

 胰酶消化传代的浓度是多少?是否含EDTA?浓度?

胰酶消化传代的一般浓度为0.25%,部分细胞由于贴壁较紧,需要加0.53mM 的EDTA,如果做原代培养,胰酶的浓度需要做适当的提高。

细胞传代消化时所用胰酶浓度并不是越高越好,因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca++, Mg++离子和血清等因素有关。通常情况下,pH 8.0 , 温度 37 oC 其作用能力最强。另外,钙、镁离子及血清均能大大降低其消化能力。我们每次进行传代消化前,一定要用D-Hanks液或PBS液反复冲洗细胞培养瓶,以便于将含血清的培养基冲洗干净,这样就能大大提高消化液的消化能力。

通常使用的消化液浓度为:
(1)0.05%胰蛋白酶+0.02%EDTA;
(2)0.25%胰蛋白酶+0.03%EDTA。
(3)0.25% 胰蛋白酶
溶液pH8.0~9.0;使用D-Hank液配制。  
多数细胞传代消化可使用0.05%胰蛋白酶+0.02%EDTA这种消化液。  

(上海钰森生物 usen2003 )


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2018-1-5 10:51:00
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