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生物器材论坛留言板『难题求援』 → [分享]冰冻切片注意事项

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标题: [分享]冰冻切片注意事项
钰森
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[分享]冰冻切片注意事项
冰冻切片注意事项

①包埋剂的选用:包埋剂是对冷冻切片质量一重要影响因素,包埋剂用量要适宜,过多或过少都会影响标本冷冻质量。常用的有三种包埋剂OCT剂、B超藕合剂以及普通胶水。B超藕合剂适用于细胞丰富质地较嫩的组织,普通胶水或 OCT剂适用于纤维丰富质地偏硬组织。(OCT包埋剂骤冷时固化,其冷冻速度和软硬韧度与组织相近,其还具有水溶性,不影响染色等优点。)

②组织块过小:先将少量胶挤在托架上预先放在冰冻机中冷冻,30秒钟左右待胶凝固时将小组织放上,组织周围再加一些胶,再次置于冷冻机中冷冻,这样组织被垫高,就能快速切出高质量的切片。

③冷冻箱及冷冻头的温度高低,要根据不同的组织而定。温度过低会导致组织块过硬,切片碎裂,出现梯田状薄厚不均或空洞;反之,温度过高,组织块硬度不够 ,切片不易成形或成皱褶。数据图1供参考。

④当切片时,如果发现冰冻过度时,可将冰冻的组织连同支承器取出来,在室温停留片刻,再行切片,或者用口中哈气,或者用大拇指按压组织块,以此来软化组织,再行切片。另者,调高冰冻点。


⑤用于附贴切片的载玻片,不能存放于冷冻处,于室温存放即可。因为当附贴切片时,从室温中取出的载玻片与冷冻箱中的切片有一种温度差,当温度较高的载玻片附贴上温度较低的切片时,由于两种物质间温度的差别,当它们碰撞在一起时,分子彼此间发生转移而产生了一种吸附力,使切片与载玻片牢固地附贴在一起。如果使用冷藏的载玻片来附贴切片,由于温度相同,没有发生上述的现象。

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2017-5-23 12:01:00
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