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标题: [分享]试剂盒提DNA的原理
l1409358961
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[分享]试剂盒提DNA的原理

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一般提取DNA的原理基于这样几个步骤:1. 浓缩样品(用词不是很准确),主要的意思就是通过离心、过滤等手段将样品(比如土壤中的微生物、植物的根细胞等)收集到一起。2. 通过物理、化学或者两者兼而有之的手段,破碎样品,使目的DNA释放出来。3. 将杂质去除。4. 清洗DNA溶液。5. 离心沉淀DNA。

以提取土壤中样品为例,简要说一下。
1. 将土样与缓冲液混合均匀,然后离心去上清,留下的沉淀再次冲洗(或者不冲洗),目的就是要初步去除土样中的杂质等。
2. 通过物理(比如超声波、玻璃珠-振荡、反复冻融)、或者化学(比如溶菌酶、表面活性剂等)等方法来破碎细胞,使目的DNA释放到溶液中。
3. 一般采用化学试剂,来去除溶液中的杂质蛋白等物质,抽提DNA。可反复操作,使DNA更纯(但是需要注意的是,抽提次数过多,会损失DNA,具体要看自己试验的需要)
4. 使用醇类物质,低温下沉淀DNA(一般是放在-20℃)
5. 离心取沉淀,然后用无菌纯水(或者TE缓冲液)来复溶DNA。
以上说的是不用试剂盒提取DNA的基本操作以及原理,推到试剂盒提取的上面,原理是一样的。

 

试剂盒原理是在特定溶液环境下(高盐、低pH)使核酸吸附在固相介质(一般是硅胶膜)上,洗涤去除杂质后,再改变溶液环境使DNA溶解到纯水或TE中。
试剂盒严格来说也分好多种,经典的是离心柱的,就是把硅胶膜固定在离心管中,类似于超滤膜,用离心力或者负压让液体通过硅胶膜,核酸就留在膜上。在经过洗涤、洗脱的步骤得到核酸。这种方法的优点是操作简单、时间短,现在也能达到很高的质量,价格也不贵。缺点是不易放大,需要多次离心。
基本步骤是先使样本裂解,在特定溶液中通过离心流过硅胶膜,再经过几次洗涤,最后加上洗脱液,离心后核酸就溶解到洗脱液中。具体的你可以根据你自己的需要到网上查一下说明书,现在做试剂盒公司的很多,步骤大同小异。
试剂盒也不是一定很便宜,对一些难度高(病毒核酸、法医样本核酸)或者要求高(去内毒素)的用途也比较贵。还有一种磁珠法提取,不需要离心,易于放大,可以用于自动化操作。
 

 

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[此贴子已经被作者于2019-4-14 21:47:54编辑过]

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2019-4-14 21:47:00
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