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标题: 采用GenEscort™ 转染试剂实施RNA干扰(RNAi)实验进行肿瘤的基因治疗研究
wisegen
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采用GenEscort™ 转染试剂实施RNA干扰(RNAi)实验进行肿瘤的基因治疗研究
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<TABLE cellSpacing=0 cellPadding=0 width=580 align=center border=0> <TR> <TD align=middle colSpan=2><FONT style="FONT-SIZE: 14px; COLOR: #000080"><b>采用GenEscort™ 转染试剂实施RNA干扰(RNAi)实验进行肿瘤的基因治疗研究----以FAK为靶点的RNA干扰的黑色素瘤基因治疗</b></FONT></TD></TR> <TR> <TD align=middle background=images/line_xiao.gif colSpan=2> <DIV align=left> </DIV></TD></TR> <TR> <TD colSpan=2> <DIV align=center> </DIV> <DIV> <b><FONT size=4>RNA 干扰</FONT></b>(RNA interference, RNAi)是由双链RNA 介导的序列特异性的转录后基因沉默现象。它通过识别与之序列相同的mRNA 来使特定基因在转录后水平被降解。RNAi 技术具有高的基因沉默效率和特异性, 为基因治疗等研究领域提供了一个新的研究手段。黏着斑激酶(FAK)是一种定位于黏着斑的非受体型酪氨酸激酶,参与调控细胞的运动和增殖等生命功能。FAK 在肿瘤的生成和恶化过程中起重要作用,在多种肿瘤细胞系中均观察到了FAK 的高表达现象,这表明了FAK 可能是一种潜在的肿瘤治疗的靶点。许多研究小组报道了在体外多种细胞系转染FAK 反义RNA 或 RNAi 的研究,观察到FAK 反义RNA 或 RNAi能有效抑制肿瘤细胞的增殖和迁移。然而至今还没有关于在体内的肿瘤中,进行以FAK 为靶点的治疗研究。由于体内生理的复杂性,体外的结果并不能代替体内的现象,为此有必要开展体内研究,为临床治疗提供必要的基础。因而,我们构建了以FAK 为靶向的RNAi 表达质粒。首先,在体外采用<B><b><FONT face="Times New Roman" color=#000000 size=2>GenEscort™ Ⅲ</FONT></b></B>试剂转染该质粒能有效抑制了B16F10 细胞中的FAK水平。同时,我们还转染了FAK的显性负作用的变体FRNK,在体外FAK 的基因沉默和FRNK 都能显著的抑制B16F10 肿瘤细胞的增殖和迁移。然后在体内实验中,我们采用了原位生长肿瘤模型和足掌主动转移模型来评价FAK 作为肿瘤治疗靶点的效果。结果显示在体内模型中,与对照组相比,两种方法都可以明显抑制原位肿瘤的生长,并阻止B16F10 细胞向引流淋巴结转移,充分说明FAK 在黑色素瘤中可以做为肿瘤治疗靶点,能够有效阻止和抑制肿瘤的主动转移,这一结果将为临床肿瘤的治疗提供新的策略。</DIV> <DIV> </DIV> <DIV align=left> 本实验的<B><b><FONT face="Times New Roman" color=#000000 size=2>GenEscort™ Ⅲ</FONT></b></B>基因转染试剂发挥了重要的工具作用,这种非病毒载体相对于病毒载体有许多优点,因而被广泛使用,近年来对 PEI 的改性,已成为研究的热点,以便使其有更好的转染效率和更小的毒性。<b><FONT face="Times New Roman" color=#000000 size=2>GenEscort™ Ⅲ</FONT></b>是一种多用途的转染试剂,该试剂由可生物降解的超高分枝的PEI衍生物与其它组分复合而成。对各种贴壁细胞有较高的转染效率、也适用于转染悬浮细胞和原代细胞。可用于转染大分子DNA、小分子寡核苷酸和siRNA等。特别适用于携带质粒或DNA、RNA片段用于注射小鼠的静脉、皮下和腹腔等部位进行体内动物实验。</DIV> <DIV align=left> </DIV> <DIV align=left><b>目录:</b></DIV> <DIV align=left> <DIV> </DIV> <DIV><B>一、 </B><B>实验材料和方法</B><B></B></DIV> <DIV><B>1</B><B>、药品试剂与质粒</B></DIV> <DIV align=left><B>2</B><B>、</B><B>FAK </B><B>干扰质粒 </B><B>psiFAK </B><B>的构建</B></DIV> <DIV align=left><B>3</B><B>、</B><B>RNA </B><B>提取</B></DIV> <DIV align=left><B>4</B><B>、</B><B>RT-PCR</B></DIV> <DIV align=left><B>5</B><B>、</B><B>Western blotting</B></DIV> <DIV align=left><B>6</B><B>、细胞转染实验</B></DIV> <DIV align=left><B>7</B><B>、</B><B>EGFP </B><B>的表达及荧光显微镜观察和流式细胞仪分析</B></DIV> <DIV align=left><B>8</B><B>、细胞周期的检测</B></DIV> <DIV align=left><B>9</B><B>、细胞迁移实验</B></DIV> <DIV align=left><B>10</B><B>、</B><B>MTT</B><B>实验</B><B></B></DIV> <DIV align=left><B>11</B><B>、伤口愈合实验</B></DIV> <DIV align=left><B>12</B><B>、免疫组化方法</B></DIV> <DIV align=left><B>13</B><B>、体内肿瘤主动转移实验</B></DIV> <DIV align=left><B>14</B><B>、体内背部肿瘤生长实验</B></DIV> <DIV align=left><B></B> </DIV> <DIV align=left><B>二、</B><B>结果</B></DIV> <DIV align=left><B></B> </DIV> <DIV align=left><B>1</B><B>、</B><B>FAK </B><B>干扰质粒</B><B>psiFAK</B></DIV> <DIV align=left><B>2</B><B>、转染试剂</B><B><b><FONT face="Times New Roman" color=#000000 size=2>GenEscort™ Ⅲ</FONT></b></B><B>的转染效率</B></DIV> <DIV align=left><B>3</B><B>、转染</B><B>psiFAK </B><B>质粒能抑制</B><B>B16F10 </B><B>细胞中</B><B>FAK </B><B>基因表达</B></DIV> <DIV align=left><B>4</B><B>、</B><B>psiFAK </B><B>及 </B><B>pKH3-FRNK </B><B>均可以抑制肿瘤细胞 </B><B>B16F10 </B><B>的增殖</B></DIV> <DIV align=left><B>5</B><B>、</B><B>psiFAK </B><B>和 </B><B>pKH3-FRNK </B><B>显著地削弱了</B><B>B16F10 </B><B>细胞的迁移能力</B></DIV> <DIV align=left><B>6</B><B>、</B><B>psiFAK </B><B>和 </B><B>pKH3-FRNK </B><B>瘤内注射抑制</B><B>FAK </B><B>功能</B></DIV> <DIV align=left><B>7</B><B>、</B><B>psiFAK </B><B>和 </B><B>pKH3-FRNK </B><B>抑制体内肿瘤生长</B></DIV> <DIV align=left><B>8</B><B>、</B><B>psiFAK </B><B>和</B><B>pKH3-FRNK </B><B>抑制</B><B>B16-F10 </B><B>细胞在小鼠体内的转移</B></DIV> <DIV align=left><B></B> </DIV> <DIV align=left><B>三、</B><B> </B><B>讨论</B></DIV> <DIV align=left><B>四、 参考文献</B></DIV> <DIV align=left><b></b> </DIV> <DIV align=left><b>注:原文共有23页,敬请关注!</b></DIV> <DIV align=left><b>GenEscort™ -- 基因的护送天使!基因的转染利器!生物制药研发创新的加速器!<a href="http://www.wisegen.com/" target="_blank" >www.wisegen.com</A> </b></DIV> <DIV align=left> </DIV></DIV></TD></TR></TABLE> <img title="dvubb" src="skins/default/fgdown.gif" border="0" /><a href="#" onClick="ConvertURL2FG('Flashget://W0ZMQVNIR0VUXWh0dHA6Ly9iYnMuYmlvLWVxdWlwLmNvbS91cGxvYWRmaWxlLzIwMDctMi8yMDA3MjEyMTMyNzQzNjc3LmpwZ1tGTEFTSEdFVF0=&2187','http://bbs.bio-equip.com/uploadfile/2007-2/2007212132743677.jpg',2187);return false;" fg="Flashget://W0ZMQVNIR0VUXWh0dHA6Ly9iYnMuYmlvLWVxdWlwLmNvbS91cGxvYWRmaWxlLzIwMDctMi8yMDA3MjEyMTMyNzQzNjc3LmpwZ1tGTEFTSEdFVF0=&2187" oncontextmenu="Flashget_SetHref(this)">[快车下载]</a>: <a href="uploadfile/2007-2/2007212132743677.jpg" target="_blank" ><img title="dvubb" src="uploadfile/2007-2/2007212132743677.jpg" border="0" alt="按此在新窗口浏览图片" /></a>
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