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评论主题: 细胞计数问题,需要实用的细胞计数仪器
评论对象: equip | 2018-8-8 15:50:00
评论言论:

用户对6楼网友意见的答复,请大家关注并发表意见:

根据这位网友意见的几句话,可以判断出这位先生不是做细胞学实验的,不明白细胞计数要解决什么问题。认为只有接近单层的贴壁细胞,才能在培养皿小方格中计数,是不对的。贴壁细胞形成贴壁以后需要计数的情况很少,只有种植一天左右,尚未增殖的稀疏贴壁细胞,才可以形成单层,增值以后细胞分泌大量胶原蛋白把细胞包联在一起,很难分辨,甚至形成复层,一般需要染色处理才可以分辨清楚。如他演示的照片图,一个小方格里密密麻麻的细胞,能够准确计数出来吗?一般细胞计数是指细胞学实验前期的细胞计数工作,目的是掌握细胞密度和细胞数量,用于细胞实验,如种植,培养,观察其变化,而不是对实验结果形成的细胞计数。

 

   这位网友认为悬浮细胞不能在培养板格子中计数也是不对的。细胞比重一般都大于1,悬浮只是暂时的,几分钟即可沉降到底面。做过细胞计数的人都知道。贴壁细胞实验一般也是先将贴壁生长的细胞“消化”,变成单个悬浮细胞以后,进行计数。肌肉细胞,上皮细胞都是贴壁细胞,一块肌肉,一片上皮组织,显微镜下无法计数细胞,必须将之消化变成悬浮细胞才能计数。

   

    细胞计数是要获得一个准确的细胞密度。细胞密度是单位体积内的细胞数量。计数细胞样本的体积准确,细胞数准确,密度才能准确。细胞计数所以有问题,主要是现行的计数方法和仪器都没有满足这两个条件,要么体积不准确(血球计数板,自动细胞计数仪),要么细胞计数不准确。我提的建议简单可行,能解决好这两个问题。将96孔细胞培养板底部划分成许多个小方格。具体说,用纵横各20 条线将底部分割成方格,96孔板底面直径6mm, 分割后是314个方格。384孔板底面直径2.7mm, 用纵横10条现分割后形成78个方格。都接近于血球计数板上的方格大小,有1020ml液体可以充满孔底。网友提供的资料图片,方格子好想不是标在培养皿底部,而是一个带格子的网膜放在培养皿底面。未见过培养皿底面有方格的,即使有也不适合。因为培养皿直径小的也在30mm以上,底面积太大,需要细胞液体太多,显微镜下将皿底全部扫描看清很难。他的方法还是取一部分细胞计数,然后推算总体细胞数,没有考虑细胞样本体积。他好像没有看清或看懂我讲的细胞计数问题。

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